SIMMONS CITRATE AGAR: RASIONAL, PERSIAPAN, DAN PENGGUNAAN - BIOLOGI - 2025

The agar Simmons sitrat merupakan medium padat digunakan sebagai mikroorganisme uji identifikasi biokimia, terutama gram - basil negatif. Media aslinya diciptakan oleh Koser pada tahun 1923.

Medium Sitrat Koser terdiri dari kaldu yang mengandung natrium fosfat, amonium fosfat, monopotasium fosfat, magnesium sulfat, dan natrium sitrat.

A. Media Komersial Agar Simmons Sitrat Dehidrasi B. Agar Sitrat Simmons yang Disiapkan. Sumber: A. Foto diambil oleh MSc. Marielsa Gil B. Roto2esdios, dari Wikimedia Commons

Seperti yang dapat dilihat, satu-satunya sumber karbon dalam medium adalah sitrat, dan nitrogen adalah amonium fosfat, menghilangkan protein dan karbohidrat sebagai sumber unsur-unsur ini, mereka umumnya ada di media lain.

Oleh karena itu, bakteri yang diinokulasi dalam media ini hanya dapat berkembang biak jika mampu mengambil karbon dari sitrat. Hasil pengujian positif jika terdapat kekeruhan dalam medium, namun memiliki kelemahan yaitu dapat terjadi kekeruhan non spesifik.

Masalah ini diselesaikan oleh Simmons dengan menambahkan bromothymol blue dan agar ke formula asli Koser. Meski prinsipnya sama, namun ditafsirkan berbeda.

Dasar

Beberapa bakteri memiliki kemampuan untuk bertahan hidup tanpa adanya fermentasi atau produksi asam laktat, perlu mendapatkan energi melalui penggunaan substrat lain. Dalam pengujian ini satu-satunya sumber karbon yang ditawarkan adalah sitrat.

Bakteri yang mampu bertahan dalam kondisi ini dengan cepat memetabolisme sitrat sebagai alternatif dari cara tradisional, menggunakan siklus asam trikarboksilat atau siklus fermentasi sitrat.

Katabolisme sitrat oleh bakteri terdiri dari mekanisme enzimatis tanpa intervensi koenzim A. Enzim ini dikenal dengan nama sitratase (sitrat oksaloasetat lyase) atau sitrat desmolase. Reaksi tersebut membutuhkan adanya kation divalen, yang dalam hal ini disuplai oleh magnesium.

Reaksi tersebut menghasilkan oksaloasetat dan piruvat, yang kemudian menimbulkan asam organik di tengah pH basa yang dibentuk oleh penggunaan sumber nitrogen. Asam organik ini digunakan sebagai sumber karbon yang menghasilkan karbonat dan bikarbonat, selanjutnya membuat lingkungan menjadi alkali.

Mode menabur

Medium sitrat Simmons harus diinokulasi sedikit ke dalam buntut ikan menggunakan jarum atau loop lurus, dan diinkubasi selama 24 jam pada suhu 35-37 ° C. Setelah waktu, hasilnya diamati.

Penyemaian dilakukan hanya pada permukaan agar-agar. Jangan tusuk.

Penafsiran

Jika media tetap berwarna asli (hijau) dan tidak ada pertumbuhan yang terlihat, pengujiannya negatif, tetapi jika media berubah menjadi biru, ini menunjukkan adanya produk alkali, yang dideteksi oleh indikator pH. Dalam hal ini tesnya positif.

Sitrat (+) dan (-). Sumber: MSc. Marielsa gil

Ini terjadi karena jika bakteri menggunakan karbon sitrat, ia juga mampu mengambil nitrogen dari amonium fosfat yang dengannya ia melepaskan amonia, menjadikan media alkali.

Sebaliknya, jika diamati pertumbuhan bakteri di dalam medium, tetapi tidak ada perubahan warna, maka uji tersebut juga harus dianggap positif, karena jika terjadi pertumbuhan berarti bakteri tersebut mampu menggunakan sitrat sebagai sumber karbon. meskipun tidak ada perubahan pH saat ini (terkadang membutuhkan waktu).

Jika ada keraguan dalam interpretasi warna akhir, ini dapat dibandingkan dengan tabung sitrat yang tidak diinokulasi.

Persiapan

Timbang 24,2 g media dehidrasi untuk satu liter air. Campur dan biarkan istirahat selama kurang lebih 5 menit. Selesaikan pelarutan media dengan memanaskannya selama 1 atau dua menit, sering dikocok.

Tuang 4 ml ke dalam tabung reaksi dan autoklaf pada 121 ° C selama 15 menit. Saat meninggalkan autoklaf, miringkan dengan bantuan penyangga sedemikian rupa sehingga agar-agar mengeras dalam bentuk paruh seruling dengan sedikit balok atau alas dan lebih miring.

PH akhir dari media sitrat adalah 6,9 (warna hijau). Media ini sangat sensitif terhadap perubahan pH.

Pada pH 6 atau lebih rendah, media berubah menjadi kuning. Warna ini tidak diamati dalam uji bakteri.

Dan pada pH 7.6 atau lebih, medium berubah menjadi biru Prusia tua.

Menggunakan

Simmons Citrate Agar digunakan untuk identifikasi mikroorganisme tertentu, khususnya basil yang termasuk famili Enterobacteriaceae dan basil fermentasi non glukosa lainnya.

Sumber: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologis. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.

Pikiran terakhir

Media sitrat Simmons adalah pengujian yang sangat rumit, karena positif palsu dapat diperoleh jika terjadi kesalahan tertentu.

Perawatan yang harus dilakukan adalah sebagai berikut:

Inokulum

Sebaiknya jangan dibuat inokulum bakteri yang sangat tebal atau bermuatan tinggi, karena dapat menyebabkan warna kuning tembaga berkembang di tempat penaburan, tanpa mempengaruhi sisa media, tetapi dapat menyebabkan terjadinya pertumbuhan. Ini tidak berarti tes positif.

Selain itu, inokulum yang tebal dapat menghasilkan positif palsu, karena senyawa organik yang terbentuk sebelumnya di dalam dinding sel bakteri yang sekarat dapat melepaskan cukup karbon dan nitrogen untuk mengubah indikator pH.

Oleh karena itu, yang ideal adalah menabur menggunakan jarum sebagai pengganti gagang platina, untuk menghindari pengambilan bahan berlebih.

Ditabur

Di sisi lain, ketika baterai tes biokimia untuk identifikasi mikroorganisme yang dimaksud sedang diunggulkan, penting bahwa tes sitrat adalah yang pertama diinokulasi, untuk menghindari terbawa protein atau karbohidrat dari media lain.

Dalam keadaan ini, dimungkinkan untuk mendapatkan positif palsu, karena salah satu zat yang dimasukkan secara tidak sengaja ini akan dimetabolisme dan akan menyebabkan perubahan pH.

Cara lain untuk menghindari terbawa zat adalah dengan membakar loop dengan baik dan mengambil inokulum baru antara satu pengujian dan pengujian lainnya.

Perhatian juga harus diberikan saat menyentuh koloni untuk melakukan inokulum, karena harus dihindari untuk menarik sebagian agar dari kultur asal bakteri, karena penjelasan di atas.

Dalam pengertian ini, Matsen, Sherris dan Branson merekomendasikan untuk mengencerkan inokulum dalam larutan fisiologis sebelum menginokulasi uji sitrat untuk menghindari transfer sumber karbon lainnya.

Intensitas warna

Harus diperhatikan bahwa intensitas warna yang dihasilkan saat tes positif dapat bervariasi menurut rumah komersial.

Selain itu, ada mikroorganisme yang dites positif pada 24 jam, tetapi ada galur lain yang membutuhkan waktu 48 jam atau lebih untuk menghasilkan perubahan pH.

Referensi

1. Mac Faddin J. (2003). Tes biokimia untuk identifikasi bakteri yang penting secara klinis. Edisi ke-3. Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologis. Edisi ke-5. Editorial Panamericana SA Argentina.
4. Laboratorium BD. BBL Simmons Citrate Agar Slants. 2015. Tersedia di: bd.com
5. Laboratorium Britannia. Agar-agar Sitrat Simmons. 2015. Tersedia di: britanialab.com
6. Laboratorium Diagnostik Valtek. Agar-agar Sitrat Simmons. 2016. Tersedia di: andinamedica.com.