CHOCOLATE AGAR: DASAR, PENGGUNAAN DAN PERSIAPAN - BIOLOGI - 2025

The agar coklat adalah media kultur padat, diperkaya, non - selektif dan non - diferensial. Ini digunakan terutama untuk isolasi mikroorganisme yang menuntut dari sudut pandang nutrisi, meskipun semua jenis bakteri dapat tumbuh di dalamnya.

Untuk itu kegunaannya meningkat terutama pada penyemaian sampel yang biasanya steril, seperti CSF dan cairan sendi. Meskipun itu juga termasuk dalam cara yang dipilih untuk menabur sampel polimikroba, tetapi dalam kasus ini perlu ditambahkan antibiotik yang menghambat flora yang menyertainya.

Chocolate agar dengan pertumbuhan bakteri

Media ini memiliki ciri warna coklat yang sangat mirip dengan coklat, itulah namanya. Sediaannya sangat mirip dengan agar darah, hanya dalam hal ini darah harus dipanaskan agar sel darah merahnya rusak.

Persiapannya, seperti agar darah, sangat halus, karena mudah terkontaminasi. Oleh karena itu, banyak laboratorium lebih memilih untuk memperoleh media ini yang telah disiapkan oleh perusahaan komersial yang menjamin kualitasnya.

Dasar

Media ini terdiri dari basis agar-agar yang kaya nutrisi dan darah yang dipanaskan. Hemolisis sel darah merah menyediakan faktor X (hemin) dan faktor V (NAD), yang diperlukan untuk pertumbuhan beberapa mikroorganisme, seperti genus Haemophilus. Juga sangat berguna untuk isolasi Neisserias sp.

Seperti agar darah, media yang berbeda dapat digunakan sebagai agar dasar tergantung pada kebutuhan. Di antara media yang digunakan adalah infus jantung otak dan agar kedelai trypticase, meskipun yang paling direkomendasikan adalah agar Columbia, Müeller Hinton, agar GC dan agar Thayer Martin.

Beberapa varian agar coklat mencakup suplemen yang diperkaya yang tersedia secara komersial yang disebut Isovitalex atau Polivitex.

Suplemen ini mengandung vitamin B ₁₂ , L-glutamine, adenine, guanine hydrochloride, p-aminobenzoic acid, nicotinamide adenine dinucleotide (NAD), tiamin pirofosfat, besi nitrat, tiamin hidroklorida, sistein hidroklorida, L-sistin, dan glukosa.

Penting untuk dicatat bahwa agar coklat lebih diperkaya daripada agar darah, tetapi tidak memungkinkan pengamatan pola hemolisis.

Aplikasi

Sumber: pixnio.com. Penulis:
Pete Seidel, Amanda Moore, MT, Todd Parker, PhD, Audra Marsh, USCDCP

Chocolate agar dibuat dengan agar Columbia

Media ini berisi pencernaan kasein dan jantung pankreas, pencernaan peptik daging, natrium klorida, agar, ekstrak ragi dan pati jagung. Ia juga kaya vitamin, mineral dan asam amino esensial.

Basis darah yang dipanaskan ini sangat ideal untuk isolasi bakteri dari genus Neisseria. Di sisi lain, jika suplemen Brucella ditambahkan ke media, mikroorganisme tersebut dapat diisolasi. Hasil ditingkatkan dengan menggunakan darah kuda.

Agar coklat dibuat dengan agar dasar GC (untuk gonococci)

Media ini mengandung pepton, tepung maizena, monobasa dan buffer dibasa, natrium klorida, dan agar.

Kebanyakan presentasi agar coklat yang dibuat secara komersial dilengkapi dengan basa ini dan tidak mengandung darah yang dipanaskan, melainkan campuran sintetis hemin dan suplemen kimiawi dari faktor pertumbuhan, vitamin, mineral, asam amino, faktor V, dan glukosa.

Chocolate agar disiapkan dengan agar Müeller Hinton

Ini digunakan untuk menguji kerentanan antimikroba dari mikroorganisme yang rewel, seperti Streptococcus pneumoniae menggunakan 5% darah domba yang dipanaskan.

Ini juga digunakan untuk isolasi utama Neisserias dan Haemophilus, tetapi dalam kasus isolasi Haemophilus tertentu, penggunaan darah kuda lebih disukai, karena merupakan sumber yang kaya faktor X dan V.

Sebaliknya, jika sampel yang akan disemai berasal dari daerah yang tidak steril, maka penambahan antibiotik dianjurkan untuk menghambat flora normal daerah tersebut.

Contoh sampel pernafasan dimana diduga terdapat bakteri dari genus Haemophilus, bacitracin digunakan untuk menghambat pertumbuhan Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus dan saprophytic Neisserias.

Dalam kasus sampel chancre genital, di mana Haemophilus ducreyi dicurigai, sebuah agar coklat yang dibuat sebagai berikut telah berhasil digunakan: Müeller - agar Hinton dengan darah kuda coklat 5%, pengayaan Isovitalex 1% dan 3 µg / ml vankomisin.

Chocolate agar disiapkan dengan agar Thayer Martin

Media ini khusus untuk isolasi Neisseria gonorrhoeae. Itu harus mengandung antibiotik untuk menghambat flora yang menyertainya. Darah domba digunakan.

Persiapan

Anda akan melihat indikasi pembuatan base agar yang akan digunakan. Mereka ditemukan di bagian belakang wadah media dehidrasi. Mereka umumnya menggambarkan berapa banyak Anda harus menimbang untuk menyiapkan satu liter media kultur.

Jumlah pasti yang dibutuhkan bisa disiapkan di laboratorium, bisa lebih atau kurang dari satu liter.

Perhitungan

Aturan tiga digunakan untuk menghitung berapa berat untuk menyiapkan volume yang diinginkan. Contoh:

Jika untuk 1 liter perlu ditimbang 40 gr dan laboratorium membutuhkan 800 ml dikatakan:

1000 ml ----------- 40 gr

800 ml -----------– X

Rumusnya adalah sebagai berikut:

X = 32 gr (jumlah yang akan ditimbang 800 ml).

Timbang dan larutkan

Kuantitas yang diperlukan ditimbang dan ditempatkan dalam labu berisi air.

Panaskan dengan api sedang dan aduk perlahan dengan gerakan memutar sampai media dehidrasi benar-benar larut, biarkan mendidih selama 1 menit.

Mensterilkan

Labu ditempatkan dalam autoklaf untuk mensterilkan media pada 121 ° C selama 20 menit.

Agregat darah

Saat meninggalkan autoclave, didiamkan hingga suhu medium kurang lebih antara 56 hingga 70 ° C untuk menempatkan darah dan aduk hingga medium berubah menjadi coklat.

Jika Anda menambahkan suplemen, inilah waktunya untuk melakukannya. Selanjutnya campur dan sajikan 20 ml ke setiap cawan petri steril.

Seluruh prosedur harus dilakukan di kap aliran laminar atau di sekitar pembakar Bunsen.

Diamkan hingga mengeras dan simpan secara terbalik di lemari es.

Cara lain untuk mengolah agar coklat tanpa menggunakan darah

Media dasar dibuat seperti dijelaskan di atas, hemoglobin dehidrasi yang diperoleh secara komersial dilarutkan dan disterilkan dalam autoklaf.

Kedua larutan dibiarkan mendingin hingga 50 ° C, digabungkan dan suplemen ditambahkan. Campur dalam kondisi aseptik lalu sajikan dalam cawan Petri steril.

QA

Penting agar darah ditempatkan pada suhu yang ditentukan, karena itu sangat ideal untuk melisis sel darah merah dan pada saat yang sama mempertahankan faktor V, yang peka terhadap panas.

Tidak ada gelembung yang tertinggal di permukaan agar-agar. Dari setiap batch yang terdiri dari 100 pelat, satu atau dua pelat harus diinkubasi dalam oven pada suhu 37 ° C selama 24 jam untuk memastikan sterilitasnya.

Untuk hasil terbaik, agar coklat harus digunakan segera setelah persiapan.

Strain bakteri pengontrol harus disimpan di laboratorium untuk mengevaluasi kemanjuran media segar untuk pertumbuhan mikroorganisme rewel utama yang penting secara klinis.

Referensi

1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Mikrobiologi klinis praktis. University of Cadiz, edisi ke-2. Layanan Publikasi UCA.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnosis Mikrobiologis Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosis Mikrobiologis. (Edisi ke-5). Argentina, Editorial Panamericana SA
4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Kelayakan penggunaan media kultur dasar GC-Biocen Agar di Laboratorium Mikrobiologi. Rev Cubana Med Trop, 2004; 56 (3): 237-238. Tersedia di: scielo.sld.
5. Kontributor Wikipedia. Agar coklat. Wikipedia, ensiklopedia gratis. 17 Desember 2018, 19:54 UTC. Tersedia di: en.wikipedia.org.