The agar BIGGY adalah selektif medium padat dan budaya diferensial. Ini dirancang untuk mengisolasi dan membantu dalam identifikasi spesies utama Candida. Namanya BIGGY berasal dari akronim dalam bahasa Inggris Bismuth Glucose Glycine Yeast.
Formula aslinya dibuat oleh Nickerson, itulah sebabnya media ini juga dikenal sebagai Nickerson agar. Saat ini terdiri dari ekstrak ragi, glisin, dekstrosa, amonium sitrat, bismut sitrat, natrium sulfit dan agar.
Representasi grafis BIGGY agar. Sumber: Flickr.com
BIGGY agar diformulasikan untuk diferensiasi spesies Complex C. albicans, C. tropicalis, C. krusei dan C. kefyr, tetapi spesies lain juga tumbuh seperti Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum dan Saccharomyces cerevisiae.
Ia memiliki sensitivitas dan spesifisitas yang baik, namun jika dibandingkan dengan media lain dengan fungsi serupa, ia menempati urutan kedua, dilampaui oleh CHROMagar. Karena alasan ini, banyak laboratorium lebih memilih yang terakhir, meskipun jauh lebih mahal.
Harus jelas bahwa penggunaan BIGGY agar, serta cara serupa lainnya, membantu identifikasi praduga cepat, tetapi tidak pernah mengkonfirmasi. Oleh karena itu, metode identifikasi tambahan harus tersedia; misalnya, sistem identifikasi Vitek 32 dan API 20.
Dasar
BiGGY agar dianggap sebagai media selektif parsial untuk isolasi khamir, terutama dari genus Candida, meskipun marga lain dapat tumbuh.
Ini juga merupakan media diferensial karena tergantung pada spesies yang terlibat, karakteristik yang berbeda akan diamati dalam hal penampilan, warna, bentuk dan ukuran. Ini dianggap sebagai media kromogenik, karena perkembangan warna yang berbeda di koloni.
Warna koloni ragi disebabkan adanya bismut sulfit pada agar. Nickerson menyadari bahwa ragi dari genus Candida melakukan reduksi ekstraseluler bismuth sulfite, mengubahnya menjadi bismuth sulfide (zat hitam yang tidak dapat larut). Ini menghasilkan koloni coklat muda sampai hitam.
Agar-agar ini mengandung ekstrak ragi dan dekstrosa, yang menyediakan sumber nutrisi dasar dan energi untuk perkembangan ragi. Glisin adalah stimulan pertumbuhan ragi, sementara itu menghambat pertumbuhan bakteri tertentu.
Dalam pengertian yang sama, amonium dan bismut sitrat, serta natrium sulfit bertindak sebagai penghambat pertumbuhan bakteri. Agar adalah agen yang memberikan konsistensi padat medium.
Persiapan
Timbang 45 g media kultur dehidrasi dan larutkan dalam satu liter air suling. Kocok dan panaskan campuran, didihkan selama 1 menit sampai larut sempurna. Media kultur ini tidak dapat diautoklaf.
Setelah mendingin hingga kira-kira 45 ° C dalam penangas air, tuangkan 20 ml ke dalam cawan Petri steril.
Warna media dehidrasi adalah abu-abu kekuningan dan dibuat berupa gel putih kekuningan, di mana dapat diamati endapan yang sedikit mengembang.
PH harus 6,8 ± 0,2.
Media yang disiapkan harus disimpan di lemari es (4 ° C) dan terlindung dari cahaya. Karena ini adalah media yang tidak dapat diautoklaf, ini harus digunakan secepat mungkin. Penggunaannya dianjurkan sebelum 3 hari setelah persiapannya.
Menggunakan
Pelat diinkubasi pada suhu kamar (25 ° C) selama 24, 48 dan 72 jam, dan waktu inkubasi dapat diperpanjang hingga 5 hari.
Setiap spesies Candida mengembangkan karakteristik tertentu yang membuat mereka membedakan satu sama lain. Produsen media menjelaskan karakteristik berikut untuk setiap spesies:
-Candida albicans complex: pada agar-agar ini berbentuk koloni halus, bulat, coklat atau hitam, dengan sedikit batas miselium. Dengan pengecualian warna gelap tidak menyebar ke tengah.
-Candida tropicalis: koloni cerah, kecil, coklat tua dengan pusat hitam dan sedikit batas miselium. Warna gelap menyebar ke arah tengah, ciri khas spesies ini, setelah diinkubasi selama 72 jam.
-Candida krusei mengembangkan koloni besar, datar, tampak kasar dengan garis tepi berwarna coklat sampai kehitaman.
-Candida parakrusei: koloni berukuran sedang, sering kali kasar, datar. Warnanya bisa bervariasi dari coklat kemerahan tua terang sampai coklat kemerahan muda. Perbatasan koloni memiliki miselium kekuningan yang luas.
-Candida stellatoidea: mengembangkan koloni sedang, rata, coklat tua, hampir hitam. Perkembangan miselium sangat langka.
Sebuah studi yang dilakukan oleh Yücesoy dan Marol pada tahun 2003, menunjukkan bahwa media CHROMagar memiliki sensitivitas dan spesifisitas yang lebih baik untuk diferensiasi dan identifikasi spesies Candida yang berbeda dibandingkan agar BIGGY.
QA
Untuk kontrol sterilitas, pelat yang tidak diinokulasi diinkubasi pada suhu 25 ° C, dalam gelap selama 24 sampai 48 jam, diharapkan tidak ada pertumbuhan apapun, atau perubahan warna.
Strain ATCC yang direkomendasikan untuk kontrol kualitas media adalah:
Kompleks Candida albicans ATCC 60193, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. Secara keseluruhan, pertumbuhan diharapkan seperti dijelaskan di atas.
Strain berikut juga bisa digunakan:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 dan Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. Pada dua yang pertama, diharapkan terjadi penghambatan total, tetapi dalam kasus pertumbuhan sebagian koloni akan berwarna krem.
Pada kasus S. aureus, diharapkan dapat terhambat total, tetapi jika tumbuh sebagian, koloninya berwarna putih.
Batasan
Beberapa bakteri mampu tumbuh dalam media ini dan bahkan dapat berubah warna menjadi gelap, meniru koloni Candida, tetapi ketika mengolesi koloni dan mengamatinya di bawah mikroskop, bakteri tersebut mudah dibuang.
Tabel: Karakteristik koloni beberapa khamir pada BIGGY agar menurut penelitian Yücesoy M dan Marol S.
Sumber: Yücesoy M, Marol S. Performa CHROMAGAR candida dan BIGGY agar untuk identifikasi spesies khamir. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7
Referensi
- Yücesoy M, Marol S. Kinerja CHROMAGAR candida dan BIGGY agar untuk identifikasi spesies khamir. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7.
- LAB MCD. Lembar Data Teknis BIGGY Agar. Tersedia di: mcdlab.net/
- Lab Neogen. BIGGY Agar. Tersedia di: foodsafety.neogen.com
- Laboratorium Conda Pronadisa. BIGGY agar. Tersedia di: condalab.com
- Laboratorium BD. BD BiGGY Agar (Bismuth Glucose Glycine Yeast Agar). 2011. Tersedia di: bd.com